هموگلوبین موجود در خون نه تنها استخراج DNA را دشوار میکند، بلکه میتواند شدیداً آنزیمهای پاییندست مانند Taq پلیمراز را مهار کند. در این راهنما، پروتکل دقیق برای رسیدن به خلوص بالا را به شما آموزش میدهم.
چرا استخراج DNA از خون چالشبرانگیز است؟
پاسخ کوتاه: دو نوع اصلی سلول در خون داریم—گلبول قرمز (RBC) و گلبول سفید (WBC).
🧬 نیاز به کیت استخراج DNA با کیفیت بالا دارید؟
مشاهده کیت استخراج DNA خون Sambio →گلبولهای قرمز هسته ندارند، اما گلبولهای سفید حامل ژنوم شما هستند. بنابراین پروتکل استخراج DNA از خون طراحی شده تا ابتدا RBCها را حذف و سپس WBCها را لیز کند.
«مجموعه مراحل دو بافر جداگانه، تضمین جداسازی کامل DNA ژنومی و حذف مهارکنندههاست.»
هدف: جداسازی گلبولهای سفید (WBC) از انبوه گلبولهای قرمز
«نمونه خون باید تازه و بر روی یخ یا یخخشک منتقل شود. نگهداری غلط، منجر به تخریب DNA و مشکلات در اثر وجود DNaseها خواهد شد.»
طراحی شده برای حذف RBC و لیز WBC طبق استانداردهای دقیق آزمایشگاهی.
| مشکل مشاهده شده | دلیل احتمالی | راهکار منتور |
|---|---|---|
| بازده کم DNA | لیز ناقص سلولهای سفید خون (WBC) | افزایش زمان انکوباسیون با بافر Lysis به ۱۵ دقیقه + وورتکس شدید |
| آلودگی پروتئینی (نسبت A260/A280 < 1.7) | شستشوی ناکافی یا باقیمانده هموگلوبین | تکرار مرحله شستشو با اتانول ۷۰٪ (حداقل ۲ بار) |
| DNA تخریب شده (اسمیر در ژل) | نمونه خون قدیمی یا وجود DNase | استفاده از خون EDTA-treated تازه (کمتر از ۴۸ ساعت) + نگهداری روی یخ |
| مشکل در PCR بعد از استخراج | وجود مهارکنندههای PCR (هم یا سدیم) | رقیقسازی DNA استخراجشده (۱:۱۰) یا استفاده از TE Buffer برای حل کردن |
| رنگ قرمز در نمونه نهایی | حذف ناقص گلبولهای قرمز (RBC) | افزایش تعداد شستشو با RBC Lysis Buffer تا pellet کاملاً سفید شود |