راهنمای استخراج RNA گیاهی
چالش‌های استخراج RNA از بافت گیاهی
استخراج RNA با کیفیت بالا از گیاهان به دلیل ویژگی‌های بیوشیمیایی منحصر به فرد آن‌ها، اغلب یک فرآیند چالش‌برانگیز است. این راهنمای تعاملی برای کمک به شما در غلبه بر این موانع و دستیابی به نتایج بهینه در آزمایش‌های مولکولی طراحی شده است.
دیواره سلولی سخت
دیواره سلولی گیاهی یک مانع فیزیکی محکم است که برای آزادسازی محتویات سلولی نیاز به تخریب مکانیکی کامل (مانند ساییدن در نیتروژن مایع) دارد.
آلودگی پلی‌ساکاریدی
پلی‌ساکاریدها (مانند نشاسته) می‌توانند همراه با RNA رسوب کرده، رسوبی ژلاتینی ایجاد کنند و آنزیم‌های مراحل بعدی را مهار نمایند.
ترکیبات پلی‌فنولی
این متابولیت‌های ثانویه پس از اکسید شدن به RNA متصل شده و باعث تخریب آن و مهار واکنش‌های آنزیمی می‌شوند.
پروتکل تعاملی: TRIzol و رسوب‌دهی با LiCl
این بخش، یک راهنمای گام‌به‌گام برای استخراج RNA با استفاده از معرف TRIzol و به دنبال آن رسوب‌دهی انتخابی با کلرید لیتیوم (LiCl) است. هر مرحله شامل پارامترهای کلیدی برای به حداکثر رساندن کیفیت و کمیت RNA می‌باشد.
هموژنیزاسیون
انجماد سریع بافت در نیتروژن مایع و ساییدن آن تا تبدیل به پودر نرم. این مرحله برای غیرفعال کردن فوری RNaseها حیاتی است.
لیز کردن و جداسازی فاز
انتقال سریع پودر منجمد به ۱ میلی‌لیتر TRIzol، افزودن کلروفرم و سانتریفیوژ برای جداسازی فاز آبی حاوی RNA.
رسوب‌دهی با LiCl
افزودن LiCl به فاز آبی برای رسوب انتخابی RNA. این مرحله به حذف آلودگی‌های DNA و پلی‌ساکاریدی کمک می‌کند.
شستشو و حل کردن رسوب
شستشوی رسوب RNA با اتانول ۷۵٪ برای حذف نمک‌ها، خشک کردن کوتاه و حل کردن در آب عاری از RNase.
مقایسه روش‌های استخراج
هیچ روشی برای همه بافت‌ها و اهداف عالی نیست. این نمودار تعاملی به شما کمک می‌کند تا مزایا و معایب روش‌های مختلف را بر اساس معیارهای کلیدی مقایسه کنید. روش‌های مورد نظر خود را برای مقایسه انتخاب کنید.
راهنمای عیب‌یابی
با مشکلات رایج در استخراج RNA مواجه شده‌اید؟ روی هر یک از علائم زیر کلیک کنید تا دلایل احتمالی و راه‌حل‌های پیشنهادی را مشاهده نمایید.
مرکز کنترل کیفی (QC)
ارزیابی کیفیت RNA برای موفقیت آزمایش‌های بعدی ضروری است. در این بخش، یاد می‌گیرید که چگونه نتایج اسپکتروفتومتری و الکتروفورز ژل را تفسیر کنید. برای مشاهده نمونه‌های خوب و بد، دکمه‌ها را فشار دهید.
نسبت‌های خلوص (اسپکتروفتومتری)
تمامیت RNA (الکتروفورز ژل)
